最近，杏耀注册日本东京理科大学的一个研究小组开发了一种新改进的单细胞RNA测序（scRNA-seq）技术。这种新方法，即终止子辅助固相互补DNA（cDNA）扩增和测序（TAS-Seq），使用简单的材料和设备，提供了比当前广泛使用的技术更精确的单细胞RNA测序数据。研究人员表示，新技术结合了遗传检测灵敏度、反应效率的稳健性和细胞组成的准确性等特性，使研究人员能够捕获重要的细胞信息。这项研究发表在27日的《通讯生物学》杂志上。

 

单细胞RNA测序的出现为医学和生物学领域带来了革命性的变化，它提供了一次研究数千个细胞内部工作的能力。但单细胞RNA测序方法在确定细胞成分方面，存在潜在的不准确性和低效的cDNA扩增。

 

新的TAS-Seq技术使用一种称为末端转移酶（TdT）的不依赖于模板的酶来进行cDNA扩增。但TdT很难处理。为了克服这一挑战，研究小组利用双脱氧核苷酸磷酸（ddNTP）作为cDNA扩增反应的“终结者”，极大地降低了TdT反应的技术难度。

 

TAS-Seq还使用了基于纳米孔的单细胞RNA测序平台，该平台允许分离组织样本中的单个细胞，从而减少细胞采样偏差并提高细胞组成数据的准确性。

 

研究小组随后验证了TAS-Seq的效率，并将其与目前广泛使用的单细胞RNA测序技术、10X Chromium V2和Smart-seq2进行了比较，其中使用了小鼠和人类肺组织样本。他们发现，与主要的scRNA-seq平台相比，TAS-Seq不仅可检测到更多的整体基因，还可识别更多高度可变的基因。

 

领导该研究的七野诚之助理教授说：“我们发现TAS-Seq在基因检测灵敏度和基因丢失率方面可能优于10X Chromium V2和Smart-Seq2，这表明TAS-Seq可能是最灵敏的高通量scRNA方法之一。我们可更均匀地检测各种表达水平的基因，也可更有力地检测生长因子和白细胞介素基因。”

 

新方法的另一个优点是TAS-Seq不太容易受到批次效应的影响。TAS-Seq数据也与组织样本上的流式细胞仪数据高度相关，表明它可以生成高度准确的细胞组成数据。

 

谈到未来，七野诚之助理教授透露：“我们已经完成了TAS-Seq2的开发，杏耀代理这是对TAS-Seq的一个改进的、经过广泛优化的版本。在小鼠脾细胞中，Tas-seq2的基因检测灵敏度要高1.5到2倍。”

 

单细胞RNA测序是医学和生物学研究的重要工具。TAS-Seq和TAS-Seq2的开发将引领新的疾病治疗靶点的发现，并在同样依赖于固相cDNA合成的“空间转录学”领域取得进展。它还将加快单细胞组学技术的发展，从而促进人们对生物学和疾病发生发展原理的了解。